Make your own free website on Tripod.com
Выводы



1. Обнаружено, что тщательно отмытые от растворимой карбоангидразы тилакоидные мембраны способны демонстрировать КА-активность.

2. Обнаруженная активность оказалась крайне требовательной к условиям выделения тилакоидов (защита от протеаз, поддержание температуры вблизи точки замерзания, наличие восстановительных агентов в среде выделения).

3. Величина активности тКА демонстрирует суточный ритм, активируясь в ходе суточного освещения.

4. Активность тКА (в отличие от растворимой КА) возрастает при повышении концентрации СО2 в воздухе при выращивании растений.

5. Найдено, что относительная активность тКА имееет максимум при рН 6,9, в отличие от соответствующей величины для растворимой КА, не демонстрирующей экстремумов рН-зависимости.

6. Впервые для известных карбоангидраз показан эффект стимуляции активности тКА низкими (10-8 - 10-6 М) концентрациями ингибиторов КА - ацетазоламидом и азидом. Эффект сохранялся после солюбилизации тилакоидов, но не проявлялся во фракции растворимой КА, дополнительно указывая на специфичность белка, ответственного за КА-активность тилакоидов.

7. Сравнение Км(HCO3-) растворимой КА и тКА показало 2-кратно меньшую величину этой величины у тКА при рН=7.0 и 4-кратно меньшую - при рН=8.0, указывая на относительное повышение роли тКА в дегидратации бикарбоната в строме хлоропласта при освещении (рН>8.0). Величина Км(CO2) также оказалась ниже у тКА по сравнению с растворимым ферментом.

8. Изменения активности тКА при последовательном разрыхлении мембраны различными концентрациями Тритона Х-100 носили 2-фазный характер в случае наличия темнового протонного градиента на тилакоидной мембране и не проявлялись при отсутствии протонного градиента. Изменение направленности градиента концентрации протонов приводило к зеркальному изменению зависимости активности тКА от концентрации детергента.

9. На основе изучения действия дибукаина и расстыковки тилакоидов на активность тКА, показано наличие барьера (в том числе электростатической природы) для диффузии бикарбоната к активному центру фермента.

10. Обнаружен эффект стимуляции активности тКА при освещении в присутствии электронных акцепторов.

11. Обнаружено, что дальний красный свет ингибирует активность тКА в фоновых условиях, но стимулирует ее в условиях перекрывания электронного потока между фотосистемами.

12. Оба стимулирующих эффекта освещения (обычным светом на фоне активного электронного потока и дальним красным светом на фоне заингибированного электронного потока) устранялись разобщителями, указывая на существенную роль протонного градиента в развитии эффектов стимуляции тКА светом.